sábado, 24 de julio de 2021

ADN recombinante en la Naturaleza y este dentro de las enfermedades cardiacas

En la naturaleza

Los virus bacterianos (bacteriófagos) añaden una serie de moléculas, como azúcares, aminoácidos y poliaminas, a las nucleobases de su ADN genómico para eludir las defensas basadas en endonucleasas de sus huéspedes. Estas hipermodificaciones del ADN se forman a través de vías biosintéticas como la 5-(2-aminoetil)uridina que sustituye al 30% de la timidina en el ADN del fago M6 de Pseudomonas. (1)


ADN Y PROTEINAS RECOMBINANTES 

T: El péptido natriurético de tipo B mejora los efectos fibróticos a través de la expresión de la metaloproteinasa 2 de la matriz en la aurícula del ratón in vivo y en miofibroblastos auriculares humanos in vitro

O:  Investigar los efectos directos del péptido natriurético de tipo B en ratones con fibrosis auricular inducida por TNF-α, así como sus efectos sobre los miofibroblastos auriculares humanos. 

G: Secuencia de glutatión S-transferasa (GST) 

ER: No especifica

EL: No especifica 

V: Vector de expresión pGEX-5X-1-humna BNP.

CR: Miofibroblastos auriculares humanos

MTG:  Cultivo ayudado con 0,1 mM de 3-isobutil1-metilxantina (un inhibidor no específico del monofosfato de adenosina monofosfato (AMP)

MIC: 

(A) RT-PCR para identificar la expresión de ARNm de NPR-A. La activación intracelular se analizó mediante un kit ELISA competitivo de GMPc. 

(B) Se analizó el nivel de MMP-2 mediante análisis de Western Blot y la densidad de cada banda se cuantificó mediante densitometría 

(C) Se analizo 2 mg de proteína concentrada por zimografía de gelatina. Se utilizó la tinción con azul brillante de Coomassie como control de carga. La densidad se cuantificó mediante densitometría 


Bibliografía:

1. Lee Y-J, Dai N, Walsh SE, Müller S, Fraser ME, Kauffman KM, et al. Identificación y biosíntesis de hipermodificaciones de timidina en el ADN genómico de virus bacterianos generalizados. Actas de la Academia Nacional de Ciencias [Internet]. 19 de marzo de 2018 [citado el 24 de julio de 2021]; 115 (14): E3116-25. Disponible en: https://www.pnas.org/content/115/14/E3116.short

ADN RECOMBINANTE 
2. Tsai Y-T, Lin F-Y, Lin C-S, Loh S-H, Li C-Y, Lin C-Y, et al. El péptido natriurético de tipo B mejora los efectos fibróticos a través de la expresión de la metaloproteinasa-2 de la matriz en la aurícula del ratón in vivo y en miofibroblastos auriculares humanos in vitro. Investigación traslacional [Internet]. Junio de 2019 [citado el 4 de agosto de 2021]; 208: 30–46. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30857762/

sábado, 17 de julio de 2021

Hibridación mediante microarrays para la cirrosis hepática alcohólica


Un factor de riesgo significativo para el desarrollo de carcinoma hepatocelular (CHC) es la detección de la expresión de miARN en cirrosis hepática que se puede medir a través de microarrays con muestras de ARN que se marcan con fluorescentes Hy3 y Hy5, luego el ARN se hibrida con la sexta y séptima generación de miRCURY LNATM microRNA Arrays, que contienen sondas de captura dirigidas a miRNAs humanos en miRBASE 18.0. Tras la hibridación, los portaobjetos de los microarrays se escanean utilizando el sistema dde microarrays Agilent G2565BA y se analizaron con el software ImaGene 9.0 que revelaron  CHC por cirrosis hepática 

Bibliografia

1. Mapeo de miARN basado en tejidos en cirrosis hepática alcohólica: diferentes perfiles en cirrosis con o sin carcinoma hepatocelular [Internet]. Biomarcadores. 2020 [citado el 17 de julio de 2021]. Disponible en: https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/1354750X.2019.1691267?journalCode=ibmk20

sábado, 10 de julio de 2021

Prueba PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) para la Cirrosis Alcohólica

 : Diferencias de sexo en la expresión de la subunidad α5 del receptor GABA A en alcohólicos con cirrosis hepática 

O: Medir la expresión del ARNm del GABAA α5 en las cortezas prefrontal y motora de alcohólicos humanos y controles emparejados mediante PCR en tiempo real. 

M:  Muestras de tejido de cerebro humano del Banco de Cerebros de Queensland

AN: ARNm que se extrajo con TRIzolTM y las muestras se transcribieron de forma inversa utilizando un oligo(dT) 20-mer.

G: Las secuencias de los cebadores GABAAa5 Forward 50 y se utilizó el RNU6B como gen de referencia

PCR: La PCR en tiempo real con SYBR Green 

V:  Utilizando el software Rotor-Gene Q (QIAGEN) 


Bibliografía:
 1. Janeczek P, Colson N, Dodd PR, Lewohl JM. Sex Differences in the Expression of the α5 Subunit of the GABA A Receptor in Alcoholics with and without Cirrhosis of the Liver. Alcoholism: Clinical and Experimental Research [Internet]. 2020 Jan 9 [citado el 10 de julio de 2021 ];44(2):423-34. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31840824/ 

sábado, 3 de julio de 2021

Alteraciones de la epigenética en la Cirrosis Alcohólica

 


La abrumadora evidencia muestra que la desregulación de los ARN no codificantes (ncRNA), en particular los microARN (miARN) provoca cambios epigenéticos inducidos por el alcohol. La regulación baja de la glicina N-metiltransferasa (GNMT) conduce a la pérdida de la función hepática que progresa a fibrosis, cirrosis y carcinoma hepatocelular, por lo cual estudios recientes detectaron que el miR-873-5p se correlaciona inversamente con la expresión de GNMT. Los estudios preclínicos con tratamiento anti-miR-873-5p recuperaron niveles de GNMT en asociación con una mejoría de la inflamación contrarrestando la apoptosis de los hepatocitos y la proliferación de colangiocitos       

Bibliografía
1. Fernández-Ramos D, Fernández-Tussy P, Lopitz-Otsoa F, Gutiérrez-de-Juan V, Navasa N, Barbier-Torres L, et al. MiR-873-5p actúa como un regulador epigenético en las primeras etapas de la fibrosis hepática y la cirrosis. Enfermedad y muerte celular [Internet]. 20 de septiembre de 2018 [consultado el 3 de julio de 2021]; 9 (10). Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30237481/

2. Li H, Du X, Huang H, Chen X, Yang Y, Huang C, et al. ARN no codificantes en la hepatopatía alcohólica. Revista de fisiología celular [Internet]. 31 de enero de 2019 [consultado el 3 de julio de 2021]; 234 (9): 14709-20. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30701547/

viernes, 25 de junio de 2021

Alteración de la traducción en la Cirrosis Alcohólica

 


Dentro de la traducción se han identificaron polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) de los genes TM6SF2 variante rs58542926 y MBOAT7  variante rs641738 como factores de riesgo para la cirrosis hepática alcohólica. Otra vía de señalización activada por el estrés del RE, la cinasa del retículo endoplásmico similar a la PKR (PERK, también conocida como factor de iniciación de la traducción eucariótica 2α-cinasa 3), se ha convertido en un proceso de activación de traducción eucariótica 2α-cinasa 3, también contribuye a la activación de las celulas estrelladas hepaticas en la cirrosis.

Bibliografía:

1. Tsuchida T, Friedman SL. Mecanismos de activación de las células estrelladas hepáticas. Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology [Internet]. 10 de mayo de 2017 [consultado el 26 de junio de 2021]; 14 (7): 397–411. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28487545/

‌2. Marcela M, Arango G, Cristina M. [Internet]. 2016 ; Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/rcg/v31n1/v31n1a05.pdf

3. Basyte-Bacevice V, Skieceviciene J, Valantiene I, Sumskiene J, Petrenkiene V, Kondrackiene J, et al. Variantes genéticas TM6SF2 y MBOAT7 en fibrosis y cirrosis hepática. International Journal of Molecular Sciences [Internet]. 2019. [consultado el26 de junio de 2021];20(6):1277. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30875804/

viernes, 18 de junio de 2021

Alteraciones en la transcripción de la Cirrosis



Encontramos que el factor de transcripción KFL2 estaba sobreexpresado durante la progresión de la enfermedad. Este tipo de factor (KLF2), se induce temprano para disminuir el desarrollo de la difusión vascular modificando la transcripción del ADN, generando la proliferación de las células estelares hepáticas mediante la secreción paracrina y autocrina del el factor PDGF y el factor de TGF-1, generando un aumento de almacenamiento de proteínas en la matriz extracelular, lo que provoca que la célula colapse provocando su lisis celular. Otra alteración es el aumento de NF-Kβ, esto genera una sobreproduccion de TNFR que llevan a la sensibilización y posterior apostosis de las células.

Bibliografía:

1. Guixé-Muntet S, de Mesquita FC, Vila S, Hernández-Gea V, Peralta C, García-Pagán JC, et al. La comunicación cruzada entre la autofagia y KLF2 determina el fenotipo de las células endoteliales y la función microvascular en la lesión hepática aguda. Revista de Hepatología [Internet]. Enero de 2017 [consultado el 18 de junio de 2021]; 66 (1): 86–94. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/27545498/
3. Ramachandran P, Dobie R, Wilson-Kanamori JR, Dora EF, Henderson BEP, Luu NT, et al. Resolviendo el nicho fibrótico de la cirrosis hepática humana a nivel unicelular. Naturaleza [Internet]. 9 de octubre de 2019 [consultado el 18 de junio de 2021]; Disponible en: https://sci-hub.se/10.1038/s41586-019-1631-3. 

3. Portal de la inducción del factor de transcripción KLF2 en el hígado mejora la cirrosis y la hipertensión [Internet]. Agencia SINC. 2016 [consultado el 18 de junio de 2021]. Disponible en: https://www.agenciasinc.es/Noticias/La-induccion-del-factor-de-transcripcion-KLF2-en-el-higado-mejora-la-cirrosis-y-la-hipertension-portal



sábado, 12 de junio de 2021

Alteraciones de la genómica en la cirrosis


Dentro de los mecanismos celulares y moleculares involucrados en la patogénesis de la cirrosis hepática humana se han identificando subpoblaciones patógenas de TREM2+ CD9+ macrófagos que maneja interacciones ligando y receptpr, ACKR1+ y PLVAP+  de las células endoteliales y PDGFRα+ de las células mesenquimales que producen colágeno, mediante la disección de un complejo interactoma profibrótico entre múltiples linajes celulares asociados a la cicatrización y se llego a las vías intra-cicatrizales de gran relevancia que incluyen la señalizacion de TNFRS12A, PDGFR y NOTCH

Bibliografía: 

1. Ramachandran P, Dobie R, Wilson-Kanamori JR, Dora EF, Henderson BEP, Luu NT, et al. Resolución del nicho fibrótico de la cirrosis hepática humana a nivel de célula única. Nature [Internet]. 2019 Oct 9 [citado 2021 Jun 13];575(7783):512-8. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31597160/


ADN recombinante en la Naturaleza y este dentro de las enfermedades cardiacas

En la naturaleza Los virus bacterianos (bacteriófagos) añaden una serie de moléculas, como azúcares, aminoácidos y poliaminas, a las nucleob...