sábado, 24 de julio de 2021

ADN recombinante en la Naturaleza y este dentro de las enfermedades cardiacas

En la naturaleza

Los virus bacterianos (bacteriófagos) añaden una serie de moléculas, como azúcares, aminoácidos y poliaminas, a las nucleobases de su ADN genómico para eludir las defensas basadas en endonucleasas de sus huéspedes. Estas hipermodificaciones del ADN se forman a través de vías biosintéticas como la 5-(2-aminoetil)uridina que sustituye al 30% de la timidina en el ADN del fago M6 de Pseudomonas. (1)


ADN Y PROTEINAS RECOMBINANTES 

T: El péptido natriurético de tipo B mejora los efectos fibróticos a través de la expresión de la metaloproteinasa 2 de la matriz en la aurícula del ratón in vivo y en miofibroblastos auriculares humanos in vitro

O:  Investigar los efectos directos del péptido natriurético de tipo B en ratones con fibrosis auricular inducida por TNF-α, así como sus efectos sobre los miofibroblastos auriculares humanos. 

G: Secuencia de glutatión S-transferasa (GST) 

ER: No especifica

EL: No especifica 

V: Vector de expresión pGEX-5X-1-humna BNP.

CR: Miofibroblastos auriculares humanos

MTG:  Cultivo ayudado con 0,1 mM de 3-isobutil1-metilxantina (un inhibidor no específico del monofosfato de adenosina monofosfato (AMP)

MIC: 

(A) RT-PCR para identificar la expresión de ARNm de NPR-A. La activación intracelular se analizó mediante un kit ELISA competitivo de GMPc. 

(B) Se analizó el nivel de MMP-2 mediante análisis de Western Blot y la densidad de cada banda se cuantificó mediante densitometría 

(C) Se analizo 2 mg de proteína concentrada por zimografía de gelatina. Se utilizó la tinción con azul brillante de Coomassie como control de carga. La densidad se cuantificó mediante densitometría 


Bibliografía:

1. Lee Y-J, Dai N, Walsh SE, Müller S, Fraser ME, Kauffman KM, et al. Identificación y biosíntesis de hipermodificaciones de timidina en el ADN genómico de virus bacterianos generalizados. Actas de la Academia Nacional de Ciencias [Internet]. 19 de marzo de 2018 [citado el 24 de julio de 2021]; 115 (14): E3116-25. Disponible en: https://www.pnas.org/content/115/14/E3116.short

ADN RECOMBINANTE 
2. Tsai Y-T, Lin F-Y, Lin C-S, Loh S-H, Li C-Y, Lin C-Y, et al. El péptido natriurético de tipo B mejora los efectos fibróticos a través de la expresión de la metaloproteinasa-2 de la matriz en la aurícula del ratón in vivo y en miofibroblastos auriculares humanos in vitro. Investigación traslacional [Internet]. Junio de 2019 [citado el 4 de agosto de 2021]; 208: 30–46. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30857762/

sábado, 17 de julio de 2021

Hibridación mediante microarrays para la cirrosis hepática alcohólica


Un factor de riesgo significativo para el desarrollo de carcinoma hepatocelular (CHC) es la detección de la expresión de miARN en cirrosis hepática que se puede medir a través de microarrays con muestras de ARN que se marcan con fluorescentes Hy3 y Hy5, luego el ARN se hibrida con la sexta y séptima generación de miRCURY LNATM microRNA Arrays, que contienen sondas de captura dirigidas a miRNAs humanos en miRBASE 18.0. Tras la hibridación, los portaobjetos de los microarrays se escanean utilizando el sistema dde microarrays Agilent G2565BA y se analizaron con el software ImaGene 9.0 que revelaron  CHC por cirrosis hepática 

Bibliografia

1. Mapeo de miARN basado en tejidos en cirrosis hepática alcohólica: diferentes perfiles en cirrosis con o sin carcinoma hepatocelular [Internet]. Biomarcadores. 2020 [citado el 17 de julio de 2021]. Disponible en: https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/1354750X.2019.1691267?journalCode=ibmk20

sábado, 10 de julio de 2021

Prueba PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) para la Cirrosis Alcohólica

 : Diferencias de sexo en la expresión de la subunidad α5 del receptor GABA A en alcohólicos con cirrosis hepática 

O: Medir la expresión del ARNm del GABAA α5 en las cortezas prefrontal y motora de alcohólicos humanos y controles emparejados mediante PCR en tiempo real. 

M:  Muestras de tejido de cerebro humano del Banco de Cerebros de Queensland

AN: ARNm que se extrajo con TRIzolTM y las muestras se transcribieron de forma inversa utilizando un oligo(dT) 20-mer.

G: Las secuencias de los cebadores GABAAa5 Forward 50 y se utilizó el RNU6B como gen de referencia

PCR: La PCR en tiempo real con SYBR Green 

V:  Utilizando el software Rotor-Gene Q (QIAGEN) 


Bibliografía:
 1. Janeczek P, Colson N, Dodd PR, Lewohl JM. Sex Differences in the Expression of the α5 Subunit of the GABA A Receptor in Alcoholics with and without Cirrhosis of the Liver. Alcoholism: Clinical and Experimental Research [Internet]. 2020 Jan 9 [citado el 10 de julio de 2021 ];44(2):423-34. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31840824/ 

sábado, 3 de julio de 2021

Alteraciones de la epigenética en la Cirrosis Alcohólica

 


La abrumadora evidencia muestra que la desregulación de los ARN no codificantes (ncRNA), en particular los microARN (miARN) provoca cambios epigenéticos inducidos por el alcohol. La regulación baja de la glicina N-metiltransferasa (GNMT) conduce a la pérdida de la función hepática que progresa a fibrosis, cirrosis y carcinoma hepatocelular, por lo cual estudios recientes detectaron que el miR-873-5p se correlaciona inversamente con la expresión de GNMT. Los estudios preclínicos con tratamiento anti-miR-873-5p recuperaron niveles de GNMT en asociación con una mejoría de la inflamación contrarrestando la apoptosis de los hepatocitos y la proliferación de colangiocitos       

Bibliografía
1. Fernández-Ramos D, Fernández-Tussy P, Lopitz-Otsoa F, Gutiérrez-de-Juan V, Navasa N, Barbier-Torres L, et al. MiR-873-5p actúa como un regulador epigenético en las primeras etapas de la fibrosis hepática y la cirrosis. Enfermedad y muerte celular [Internet]. 20 de septiembre de 2018 [consultado el 3 de julio de 2021]; 9 (10). Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30237481/

2. Li H, Du X, Huang H, Chen X, Yang Y, Huang C, et al. ARN no codificantes en la hepatopatía alcohólica. Revista de fisiología celular [Internet]. 31 de enero de 2019 [consultado el 3 de julio de 2021]; 234 (9): 14709-20. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30701547/

ADN recombinante en la Naturaleza y este dentro de las enfermedades cardiacas

En la naturaleza Los virus bacterianos (bacteriófagos) añaden una serie de moléculas, como azúcares, aminoácidos y poliaminas, a las nucleob...